### 下一代全基因组人源化小鼠构建技术

尊龙凯时推出的TurboKnockout®技术是一种先进的基因编辑工具，基于传统ES打靶技术进行升级，能够高效筛选出基因敲除、敲入及点突变的纯合ES细胞。这一技术结合了囊胚前注射和四倍体补偿技术，确保产生的Founder小鼠达到100%嵌合状态，所有组织细胞均由外源ES细胞分化而来，从根本上解决了传统技术中嵌合体比例不稳定的问题。通过TurboKnockout®技术，基因编辑周期可缩短至3个月，能够大批量获取基因一致的纯合小鼠。

### TurboKnockout®技术验证流程

该技术的稳定性经过一系列实验验证，流程包括载体构建、ES打靶、PCR/FACS验证、阳性胚胎制作，以及嵌合率验证。首先，我们构建了Rosa26安全位点的过表达载体CAGLuciferaseEGFP质粒，并在C57BL/6NWT ES细胞中获得了PCR正确的阳性克隆，随后通过流式细胞术确认EGFP的正确表达。

### 阳性Founder小鼠的构建与验证

接下来，通过显微注射阳性ES克隆获得阳性Founder小鼠，并通过常规传代获得纯合F2代雄鼠。将F2雄鼠与C57BL/6NWT雌鼠配繁，生产可用于TurboKnockout®技术显微注射的阳性受体胚胎。随后，通过显微注射C57BL/6NWT的ES细胞与未注射ES细胞的空扎受体胚胎，分别得到125天胚胎及4周龄Founder小鼠，验证Founder小鼠中Luciferase和EGFP的表达情况。

结果显示，空扎胚胎与注射C57BL/6NWT ES细胞的胚胎在EGFP表达上有显著差异，且流式细胞仪检测结果证实所有注射了C57BL/6NWT ES细胞的胚胎未检测到EGFP阳性细胞泄露。对空扎胚胎和注射了WTES细胞的胚胎移植到ICR代孕鼠后，经过4周龄时的活体成像，结果显示注射了C57BL/6NWT ES细胞的胚胎并未出现Luciferase荧光泄露，而空扎的胚胎发育的小鼠则表现出强烈的Luciferase荧光，差异显著。

### CAGLuciferaseEGFP细胞的嵌合状态验证

为了进一步确认注射C57BL/6NWT ES细胞的胚胎中CAGLuciferaseEGFP细胞的嵌合状态，我们对注射了WTES细胞的4周龄小鼠及125天胚胎的心、肝、脾、肺、肾组织进行了PCR验证，结果显示各组织与胚胎均未检测到MT条带，这进一步证明了尊龙凯时TurboKnockout®技术的有效性及可靠性。

### 总结与优势

通过TurboKnockout®技术生产的Founder小鼠均为100%嵌合状态，所有组织细胞均由外源ES细胞分化发育而来。这一技术具备多样化的基因编辑类型，如基因敲除、敲入、点突变等，且具备多样的质量控制体系，确保基因修饰的准确性和稳定性。另外，尊龙凯时提供灵活的品系选择，涵盖C57BL/6NCya、C57BL/6JCya、BALB/cAnCya、129S2/SvPasCya等，充分满足不同研究需求。

在此基础上，尊龙凯时还研发了HUGO-GT®全基因组人源化小鼠，实现了鼠源基因的原位替换，构建了更丰富的干预靶点。同时，基于HUGO-Ab®全人源抗体小鼠，我们提供了一系列完整的人类免疫球蛋白基因，能够产生高亲和力和低免疫原性的全人源抗体，成为药物研发的高效引擎。

尊龙凯时期待为您提供更多基因编辑定制服务，无论是完全性基因敲除小鼠，还是条件性基因敲除小鼠，均能满足您的研究需求，为药物筛选、信号通路分析和遗传机制解析提供高效工具。