想精准诱导RAW2647细胞成为促炎的M1“战士”或抗炎的M2“修复者”？别再寻找了！这份保姆级、超详细的RAW2647细胞M1/M2极化方案，将试剂配比与操作细节一次性打包给你！

细胞信息

细胞：RAW2647小鼠单核巨噬细胞系
注意：传代次数不宜过多，建议控制在10代以下。

培养基及试剂

培养基：高糖DMEM
血清：胎牛血清(FBS)，推荐使用10%
抗生素：青霉素-链霉素双抗溶液（1%）
关键诱导剂：溶剂对照：PBS或细胞培养基（用于溶解冻干诱导剂的溶剂）

注意：所有细胞因子和LPS建议分装后在-20℃或-80℃保存，避免反复冻融！使用前务必在冰上或4℃缓慢溶解，并用预冷的培养基或PBS稀释至工作浓度。

细胞接种

将细胞以2~3x10⁵ cells/孔的密度接种于6孔板中，每孔加入2mL完全培养基。
注意：过低的接种密度会影响细胞状态，过高可能导致接触抑制或自发分化。

小心吸弃孔内旧培养基。
可选步骤：加入1-2mL预热的PBS，轻轻洗涤细胞表面，以去除残留血清及代谢废物。

更换极化培养基

M1组：每孔加入2mL含100ng/mL的LPS和20ng/mL的IFN-γ的完全培养基。
M2组（以M2a为例）：每孔加入2mL含20ng/mL的IL-4和20ng/mL的IL-13（可选项）的完全培养基。
对照组1-未处理：仅添加2mL新鲜完全培养基。
对照组2-溶剂对照：加入含有诱导剂等体积溶剂的完全培养基（以排除溶剂本身的影响）。

培养条件

在37℃，5% CO₂条件下继续培养。24小时是常用且效果显著的标准时间点。
注意：根据实验目的（如检测早期/晚期基因、蛋白分泌），可调整至6、12、48或72小时，但需进行预实验以验证合适性。

极化表型验证

诱导后24小时，可以通过以下方法验证极化表型：

• Western Blot/ELISA（蛋白提取）：加入适量预冷的RIPA裂解液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂），在冰上裂解，收集裂解液。
• Western Blot：检测iNOS，Arg1，CD206等关键蛋白的表达水平。
• ELISA：检测上清液中TNF-α，IL-6（M1），以及CCL17，CCL22（M2a）等细胞因子的分泌水平。
• 流式细胞术：用不含EDTA的胰酶进行轻柔消化（时间不宜过长），或用细胞刮去收集细胞，洗涤并重悬于预冷的PBS（含1-2% FBS）中染色。
• 免疫荧光：进行固定、通透和染色操作。

细胞形态观察

M1细胞常变得更圆、更亮、伪足减少；M2细胞则可能呈现更拉长、铺展的形态，类似“煎蛋”状。这只是辅助观察，不能作为单一判定标准。通常需结合至少两种方法（如qPCR+流式）综合判断极化是否成功且特异。

品牌推荐

尊龙凯时提供科研级IFNgamma、IL-4、IL-10、IL-13等细胞因子产品，具有高活性、低内毒素特性，助力体外巨噬细胞培养。

RAW2647来源巨噬细胞培养因子目录：

• C746（引用文献50+） 重组小鼠IFNgamma
• CK15（引用文献70+） 重组小鼠IL-4
• C697（引用文献5+） 重组小鼠IL-10
• CH18（引用文献5+） 重组小鼠IL-13

强烈推荐使用尊龙凯时的产品，以获得优质的实验结果和可靠的支持。